Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型乳癌患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常借助于现胰脏自身免疫到经常借助于现1M-心血管疾病诊断病症的成果率在儿童中期就有很好的刻画，多个胰脏自身免疫阳性的儿童当中亦有70%在血清叠加后10在短期内患上心血管疾病，而随访15年的儿童这一比率增加到84%。远比，分之一诊断1M-心血管疾病一半以上的M-1M-心血管疾病的胃癌机制还没有给与充分的科学研究。

越来越多的人开始用作分期子系统来定义1M-心血管疾病的成果：个体在经常借助于现多种胰脏自身免疫时进入第1收尾，经常借助于现血糖极其时进入第2收尾，经常借助于现病症时进入第3收尾。一些多发胰脏自身免疫阳性的个体，在1期和2期，成果很慢，并拓展为胃癌的1M-心血管疾病。我们之后刻画了一一个大在首次检测到多种胰脏自身免疫抽样后有数10年无心血管疾病的快得多成果者，这一个大病患人口数少，但特征极其清楚。随后，我们发现胰脏自身上皮细胞特异性CD8+T线或粒体重排在成果极快的病患当中整体不存在，但在近期胃癌和普遍存在的心血管疾病病患当中很容易检测到。这可能会表明，与成果病患远比，这些病患自身免疫重排的调节减弱。

以前科学研究表明，尽管调节性T线或粒体(Treg)数量正常，但心血管疾病病患存在一些基本功能原因，其当中除此以外对IL-2的重排能够降低。此外，心血管疾病病患当中的物理现象CD4+T线或粒体可能会对调节更具抵抗性，观感为物理现象T线或粒体的依赖性减弱，自然显现借助于的Treg和体外显现借助于的诱导Treg，以及上皮细胞随之而来的CD4+T线或粒体当中IL-2重排减弱。本科学研究的目标是刻画了CD4+调节性T线或粒体(Treg)在一小群极极快成果者当中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的垂直科学研究，在21岁以下确诊的病患子女当中检查1M-心血管疾病的危险因素。我们之后刻画了长期极快成果者的特征，他们保持良好多重胰脏自身免疫阳性超过10年，但没有经常借助于现心血管疾病的诊断病症，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续保持良好无心血管疾病并愿意提供大量肠道抽样的极快成果者归属于T和B线或粒体基本功能数据分析。在目前的科学研究当中，8名慢成果者(SP一个大)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的胰脏自身免疫阳性。所有的参与者都处于1M-心血管疾病成果的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身免疫对某些上皮细胞的阳性重排，然而，一名病患已经处于2期有数6年，但没有经常借助于现诊断病症，一名病患被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在搜集实验抽样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析当中对该诱导开展了直接评估。分离外周血单个核线或粒体(PBMCs)，采用多模板流式线或粒体法术和T线或粒体依赖性试验评估诱导当中Treg的kHz、表M-和基本功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无督导聚类数据分析，评估Treg表M-。

结果：与保健诱导远比，来自慢成果体的梦境CD4+T线或粒体的督导聚类显示，激来生的梦境CD4+ TregkHz增加，与糖皮质激素诱导的TNFR无关肽(GITR)表述增加有关。一名HbA1c上升的病患与成果极快者和匹配的比对一个大远比，Treg谱有所不尽相同。基本功能数据分析表明，与保健诱导远比，来自极快成果体的Treg介导的CD4+物理现象T线或粒体依赖性明显损坏。观感为对物理现象CD4+T线或粒体CD25和CD134表述的依赖性增加。

平面图1 深入的表M-数据分析显示，CD4+Treg亚M-在慢成果缓冲区当中增加。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有诱导的来生CD4+CD45RA -线或粒体上。根据标示借助于物表述鉴定借助于10个元簇:梦境T线或粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T线或粒体;HLA-DR + GITR +梦境T线或粒体;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)用作9个不尽相同Treg标示借助于生成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个一个大(100个一个大)，巨大的元一个大(10个元一个大)在数据流一个大附近打磨。每个数据流当中的饼平面图暗示单个标示借助于的表述级别。(b)每个元聚类的热平面图，以显示整体标示借助于表述。(c, d)为HD一个大(c)和SP一个大(d)生成平面图，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)远比之下丰度为每个metacluster盒线或平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP一个大:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T线或粒体(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T线或粒体(l)。深深蓝色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用作CITRUS的预测模M-得出结论，TregkHz的增加是成果极快的标志。分级门控(a - f)和甜菜数据分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T线或粒体上的相似之处。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述开展分离，模拟FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)一个大以及诱导SP 606(深深蓝色)当中CD25+ cd127的kHz摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的盒线或平面图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述其中心着色，箭头突借助于的簇被定位为SP和HD缓冲区彼此间的不尽相同。(j)盒线或平面图显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)一个大当中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的远比之下丰度(比率)。(k)数据集显示每个簇的表M-(粉红色)和Treg标示借助于远比之下表述与文化背景表述(深蓝色);上列，线程Treg_3;示例正要，线程Treg_4。文化背景与所有其他簇当中标示借助于的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与保健献血者远比，成果极快者梦境treg的GITR增加。每个梦境CD4+T线或粒体元簇(梦境T线或粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T线或粒体;HLA-DR + GITR +梦境T线或粒体;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表述标示借助于的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的表述热平面图(sp606不除此以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，显示数据集(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深深蓝色)所有诱导除此以外，p< 0.05(深蓝色)诱导SP 606和匹配的HD不除此以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表述，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)串联，显示数据集(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自极快成果的CD4+ treg线或粒体控制物理现象CD4+T线或粒体的能够降低。SP一个大用深蓝色的线或和橘色暗示，HD一个大用灰色的线或和橘色暗示，深深蓝色的线或/橘色暗示诱导sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒体开展分选。CD4+CD25−(其所答者)被标示借助于为CFSE, Treg按捕捉到的比率溶液。用抗CD3 /28微珠诱导线或粒体，养成3同一天开展流式线或粒体法术检测。(a-d)与CD4+其所答者远比之下其所的treg养成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD其所答者养成。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE依赖性倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性倍数。用作阳性比对(激来生的拥护线或粒体不含treg)计算依赖性倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 物理现象CD4+T线或粒体对极快成果的T线或粒体诱导的依赖性更极端。SP一个大用深蓝色的线或和橘色暗示，HD一个大用灰色的线或和橘色暗示，深深蓝色的线或/橘色暗示诱导sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒体开展分选。CD4+CD25−(其所答者)被cfsel标示借助于，treg按捕捉到的比率溶液。用抗CD3 /28微珠诱导线或粒体，养成3同一天开展流式线或粒体法术(CD25反染)和线或粒体因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606其所答者共同养成。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE依赖性百分率(b)。(c,d) CD25依赖性百分率(c)和CD134依赖性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成当中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得借助于的结论是，来自极快成果子的诱导梦境CD4+Treg在GITR表述当中给与了扩展和丰富，强调了进一步科学研究Treg在1M-心血管疾病几率个体当中的异质性的必要性。

译者借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28